Аналіз слини, як альтернатива аналізу крові

Аналіз слини, як альтернатива аналізу крові

Протягом багатьох років слина людини використовувалася як біологічна рідина для виявлення різноманітних біомаркерів, таких як електроліти, гормони, ліки та антитіла.

Вибір на користь забору слини має очевидні переваги перед забором зразків крові. Забір слини – це:

• Неінвазивна процедура,
• Безболісна і зручна, особливо для пацієнтів,
• Збір зразків слини можливий у будь-який час – вдень чи вночі,
• Краща альтернатива, коли забір крові ускладнений або недоцільний (для дітей та літніх людей)

Чим відрізняються за складом фракції гормонів у крові та слині?

Рис. 1. Стан стероїдих гормонів у крові та слині. Кров – зв’язані та незв’язані (вільні) стероїди. Слина – виключно вільні стероїди.

Стероїди у крові перебувають у кон'югованому або некон'югованому стані. Кон’юговані форми стероїдів, сульфати або глюкуроніди, виводяться нирками. Некон’юговані форми стероїдів здебільшого зв’язуються з різними білками-носіями, зокрема, глобуліном, який зв’язує кортикостероїди (CBG) або глобуліном, який зв’язує статеві гормони (SHBG). Ця зв’язана фракція складає 95-99 % від загальної кількості некон’югованих стероїдів у плазмі або сироватці. Зв'язана фракція є біологічно неактивною і загалом виконує важливу фізіологічну роль в якості резерву стероїдних гормонів.
Лише невелика частина, приблизно 1-5 % стероїдів у сироватці, є вільною і біологічно активною фракцією. Тому будь-яке вимірювання стероїдних гормонів у сироватці або плазмі буде в основному відображати загальний рівень неактивних гормонів.
Оцінка стероїдних гормонів у слині дозволяє специфічно визначити біологічно активну або «вільну» фракцію цільового гормону. Тільки ця вільна фракція може проходити через бар'єр (мембрану), який утворюють ацинарні клітини з оболонки слинної залози. Це означає, що вільна фракція стероїдів у слині корелює з кількістю вільного та біологічно активного гормону у крові.

Хто зараз використовує аналіз зразків слини?

• Лабораторії традиційної медичної допомоги,
• Академічні лабораторії,
• Нетрадиційна медицина

Попит на вимірювання маркерів та моніторинг стану здоров’я постійно зростає. Завдяки можливості оцінити зразок слини, об’єднаний з кількох колекцій, можна отримати надійну оцінку концентрації гормонів, навіть за умови значних добових коливань.

Як виміряти стероїди в слині?

Аналітичні набори для визначення стероїдів у слині повинні бути високочутливими, оскільки концентрації біологічно активних вільних фракцій значно нижчі за загальний рівень концентрації гормонів у сироватці. Імуноаналіз дозволяє надійно вимірювати низькі концентрації гормонів у слині.

Які продукти пропонує Tecan?

Tecan пропонує широкий спектр аналітичних наборів ( immunoassays ) для вимірювання у зразках слини, включаючи набори для визначення кортизолу, прогестерону, тестостерону, естрадіолу, естріолу, естрону, DHEA, DHEA-S, 17-OH-прогестерону, а також інших маркерів, таких як мелатонін і альфа-амілаза. Tecan пропонує високочутливі імунолюмінесцентні та ІФА набори, які були спеціально розроблені і перевірені на зразках слини.

Причини вибрати набори від Tecan

Ми ретельно розробляємо, виготовляємо і реалізуємо набори з такими характеристиками:

• Дуже висока аналітична чутливість для кількісного визначення 2,1-50 пг/мл гормонів, (наприклад, межа визначення естрадіолу ~ 2,1 пг/мл),
• Набори для імунолюмінесцентного аналізу та ІФА,
• Малий об'єм зразків слини 20-100 мкл,
• Немає необхідності у додатковій обробці зразків на етапі вилучення аналіту,
• Набір реагентів готовий до використання (крім промивного буферу),
• 2 контрольних зразка у комплекті – нормальний і підвищений,
• Проста процедура тестування,
• Доступні набори для тестування 1-10 x 96 зразків.

Наша мета – забезпечити:

• Швидке, надійне та професійне обслуговування
• Спроможну науково-технічну підтримку
• Всесвітню допомогу завдяки міжнародній дистриб'юторській мережі

Що потрібно знати про забір слини?

1. Значення швидкості виділення слини.
Швидкість виділення слини може впливати на концентрацію гормонів у зразках. Таке відбувається у випадку, якщо гормон має високу молекулярну масу, є полярною або іонізованою молекулою, що ускладнює точне визначення. З іншого боку, концентрація малих і неполярних молекул у зразках не залежить від швидкості виділення слини. Це дуже важливий аспект у дослідженнях слини. Класичним прикладом є вимірювання дегідроепіандростерону (DHEA) і дегідроепіандростерон-сульфату (DHEA-S) у слині. DHEA – маленька і неполярна молекула, тому у вільній формі може переходити із судинної системи у слину. Концентрація DHEA у слині відображає фракцію вільного і активного гормону, що міститься у крові. DHEA-S – полярна молекула, тому не може пасивно проходити через тканинний бар’єр (мембрану). Як наслідок, концентрація DHEA-S у слині, залежить від наявності ран у ротовій порожнині або активності білків-транспортерів, що може спотворювати результати тестування. У крові DHEA і DHEA-S слабо зв’язуються з альбуміном, тоді як у слині гормони присутні лише у вільній і активній формі. Концентрація DHEA у слині становить приблизно 1:30 від концентрації в сироватці, тоді як концентрація DHEA-S у слині значно нижча (від 1:500 до 1:1000) і залежить від швидкості виділення слини.

2. Пристрій для відбору слини.
Підготовча фаза та вибір пристрою для відбору проб слини мають вирішальне значення для отримання достовірних даних і не повинні впливати на результати дослідження. На відміну від плазми або сироватки, слина містить дуже низькі рівні гормонів, що робить взаємодію аналітів з поверхнею пристрою для відбору проб набагато більш вірогідною. Будь-який пристрій для відбору зразків слини необхідно перевіряти шляхом вимірювання ступеню вилучення аналіту з слини. Tecan пропонує пристрій для відбору проб слини з ультра чистого поліпропілену – SaliCap – для мінімізації взаємодії з поверхнею та відмінностей між аналізами (менше 5 %), навіть для прогестерону. Якщо для відбору та транспортування зразків слини використовуються альтернативні пристрої, лабораторії потрібно буде перевіряти швидкість поглинання аналіту матеріалом, з якого було зроблено вибраний пристрій.

3. Вплив забруднення кров’ю
Важливо уникати будь-якого забруднення кров’ю, оскільки загальна концентрація стероїдних гормонів у крові може бути у 100 разів вищою, ніж у слині. Кожен пацієнт повинен знати, що потрібно відкинути будь-який зразок, який має навіть незначний відтінок червоного кольору. Якщо відбулося потрапляння крові у зразок, пристрій для відбору проб слід двічі промити водопровідною водою, а потім почекати 10 хв, перш ніж знову взяти пробу.

Що можна і чого не можна робити при тестуванні слини.

• Вибір пристрою для відбору проб
  Пристрій з ультра чистого поліпропілену SaliCap від Tecan забезпечує належне вилучення стероїдів із слини, а також мелатоніну і альфа-амілази.
• Час відбору
  Чітка стратегія відбору зразків призводить до відтворюваних результатів. Концентрація багатьох аналітів у слині дуже динамічна, зокрема у випадку тестування кортизолу.
• Споживання їжі та напоїв
  Рекомендується голодувати щонайменше 30 хв перед відбором зразків слини. Найкраще прополоскати рот водою перед відбором слини, особливо після їжі.
• Відбір слини
  Для того, щоб забезпечити зручне і послідовне отримання зразків, рекомендується метод пасивного відбору слини. Просто почекайте поки слина сама потече з рота, перш ніж відправити зразок слини у зонд.
• Обсяги для аналізу
  Чим більше аналітів ви плануєте визначати у зразку, тим більший об’єм слини потрібно зібрати. Для тестування потрібні об’єми близько 20-100 мкл, залежно від аналіту.
• Забруднення кров’ю
  Не слід використовувати проби слини з найменшим червоним відтінком, оскільки загальна концентрація стероїдів у крові може бути у 100 разів вище, ніж у слині.
• Вимірювання за допомогою аналітичних наборів
  Переконайтеся, що використовуєте достатньо чутливий аналітичний набір. Набір для слини від Tecan є високочутливим і протестований саме для цього застосування. Це важливо для виявлення низької концентрації гормонів у слині. Слід перевірити чутливість, специфічність, відтворюваність, контрольні значення та відповідність методу тестування для досягнення мети за медичного обстеження або лікування.
• Попередня обробка слини
  Рекомендується піддавати зразки слини циклу заморожування-відтавання та центрифугувати, що дозволяє розщепити муцин і забезпечити належну точність вимірювання.
• Ліки та медичні процедури
  Деякі ліки або медичні процедури можуть впливати на концентрацію гормонів і на результати аналізів. Це слід враховувати при отриманні та інтерпретації результатів.

Сфери застосування тестування слини

Тестування слини вже є невід’ємною частиною деяких галузей, таких як ендокринологія, психологія та дослідження стресу. Переваги слини, як матриці для аналізу, добре відомі. Це включає створення точних щоденних гормональних профілів пацієнтів шляхом збору багатьох зразків за короткий проміжок часу.

Що відбувається в організмі під час стресу?

Рис. 2: Стрес і гіпоталамо-гіпофізарно-адреналова система.

Стрес надниркових залоз – це загальний термін для великої кількості симптомів, які вказують на те, як організм справляється зі стресом. Стрес – це будь-який вид фізичного, психічного або емоційного напруження. Організм реагує таким чином, що починає виробляти адренокортикотропний гормон (ACTH) у гіпофізі, який активує вироблення інших агентів стресу, таких як кортизол і DHEA у надниркових залозах. Їхня роль — керувати потоком гормонів, пов’язаних зі стресом, і регулювати різні функції організму, включаючи сон і настрій, а також обмін жирів і білків. Чим вищий рівень постійного стресу надниркових залоз, тим нижча концентрація гормону. Кортизол допомагає оцінити реакцію на стрес і справляє катаболічний ефект, тоді як DHEA є антистресовим гормоном і визначає рівень адаптації до стресу. Дисбаланс продукції гормонів у надниркових залозах може бути провідним фактором, пов’язаним з багатьма випадками клінічних станів, включаючи фіброміалгію, гіпотиреоз, синдром хронічної втоми та депресію. Індекс стресу надниркових залоз включає визначення рівнів кортизолу і DHEA, що дозволяє виявити дисфункцію надниркових залоз.

Як ви вимірюєте стрес?

Психологічні дослідження пов’язані з наукою про поведінку та психічні процеси, зокрема такі галузі, як біологічна, когнітивна та соціальна психологія. У багатьох випадках психічний статус пацієнта встановлюється за допомогою анкет з самооцінки. Також дуже важливо дослідити біологічний статус пацієнта. Продукція багатьох гормонів в організмі підтримується у відповідності до 24-год ритму. Система гіпоталамус-гіпофіз-надниркові залози (HPA) є одним з найважливіших джерел формування циркадних ритмів в організмі людини, що має великий вплив на дієздатність та активність імунної системи. Аномальні зміни у гормональному ритмі причетні до багатьох захворювань, як визначають дослідження присвячені пошуку ефективних ліків. Рівні кортизолу, DHEA, тестостерону та альфа-амілази пов’язані з розвитком хронічного стресу і посттравматичного стресового розладу, поведінкою, когнітивними функціями та здоров’ям. Тому провідні психологи та спеціалісти з інших напрямків медичної допомоги зацікавлені у визначенні рівнів цих гормонів у зв’язку з дослідженням циркадних моделей.

Рис. 3: Зміни концентрації кортизолу за умови помірного психосоціального стресу.

Дослідження ендокринологічної реакції організму людини на різні види стресу засвідчують, що концентрація кортизолу підвищується, коли людина знаходиться у стресовій ситуації. Соціальний стрес-тест Триера (TSST) – це стандартизований тест, який широко використовується у дослідженнях для характеристики індивідуальних реакцій на стрес. Варто зазначити деякі фактори, наприклад, стать або стадія менструального циклу, які можуть впливати на перебіг стрес-реакції та рівень кортизолу. Застосування ліків, таких як оральні контрацептиви, можуть зменшувати рівень кортизолу при стресі.

Що відбувається при гормональному дисбалансі?

Гормони є хімічними посередниками, які продукуються у низьких концентраціях і впливають на функціональну активність усіх органів і тканин. Належний баланс гормонів є запорукою здоров’я, а вимірювання рівня концентрації гормонів є показником загального стану пацієнта. Будь-який надлишок або дефіцит концентрації гормонів може призвести до серйозних захворювань, і це потрібно лікувати. Вільна і біологічно активна фракція гормонів може бути виявлена у слині, тому рекомендуємо вимірювати рівні окремих гормонів, щоб забезпечити оптимальне лікування, включаючи замісну гормональну терапію. Найчастіше такі методи лікування передбачають введення препаратів для штучного відновлення гормонального балансу.

Які гормони визначають ваш сон?

Професійні захворювання, такі як порушення сну у змінних працівників, можуть призводити до психологічного і фізичного стресу. При цьому типі розладів корисно оцінювати окремі циркадні ритми, поєднавши вимірювання концентрації мелатоніну та кортизолу, які змінюються відповідно до циркадних ритмів у протилежний спосіб.

Рис. 4: Добовий ритм секреції мелатоніну та кортизолу.

Мелатонін є ключовим гормоном, який сприяє здоровому нічному сну. Рівень мелатоніну збільшується незабаром після настання темряви, досягає піку у середині ночі між 2 та 4 год і поступово знижується протягом другої половини ночі. Рівень мелатоніну протягом дня приблизно у 10 разів нижче. Рівень кортизолу, з іншого боку, дуже динамічно змінюється протягом дня і зазвичай досягає піку рано вранці. Однак настання цього піку кортизолу залежить від моменту пробудження людини, а не від фактичного часу або денного світла. Рівні кортизолу і мелатоніну вважаються маркерами стресу. Дослідження показують, що мелатонін може впливати на рівень кортизолу. Ці результати використовують при тестуванні розладів сну.

Що відбувається, коли кортизол занадто високий?

Синдром Кушинга є результатом надмірної секреції кортизолу і характеризується тим, що концентрація кортизолу не досягає найнижчого рівня пізно вночі у відповідності з циркадним ритмом. Цю ендокринну патологію важко діагностувати, оскільки такий стан може бути обумовлений безліччю причин. Ендокринна система складається з кількох залоз розташованих окремо, які виділяють гормони безпосередньо у кров. Багато гормонів мають безліч різних функцій і способів дії; один гормон може впливати на ряд різних органів-мішеней, а на один орган-мішень є чутливим до більше ніж одного гормону. У більшості випадків ендокринні розлади відбуваються за участі декількох гормонів, що робить їх складними для розуміння і діагностики. Такі пацієнти часто страждають від ожиріння, гіпертонії, депресії, алкоголізму та ін.

Рис. 5: Діагностика синдрому Кушинга.
Джерело: Raff H, Pituitary 2012; 15:64-70

Вимірювання рівня кортизолу у слині вночі є загальноприйнятим і рекомендованим методом діагностування синдрому Кушинга. Цей метод демонструє високу специфічність і чутливість, а процедуру визначення гормону проводять з використанням ІФА або імунолюмінесценції. Зауважимо, що для імунолюмінесцентного аналізу кортизолу у слині з набором від Tecan потрібно лише 20 мкл зразка, що робить його придатним для тестування зразків навіть у дітей або літніх людей.

Навіщо вимірювати тестостерон?

Вимірювання вільного тестостерону є ідеальним інструментом для визначення рівня андрогену як у чоловіків, так і у жінок, але точність визначення тестостерону залишається проблемою, оскільки тестування зразків сироватки звичайними методами імуноаналізу не дає надійних результатів. Безпосереднє вимірювання тестостерону у слині є кращою альтернативою тестам на крові, оскільки у слині присутня лише вільна і біологічно активна фракція гормону. Набори від Tecan: Testosterone Saliva Luminescence і Testosterone Saliva ELISA – демонструють високу аналітичну та функціональну чутливість, що дозволяє кількісно визначати дуже низькі концентрації гормону у слині. Дослідження показують, що рівень вільного тестостерону у слині в ранкових пробах добре корелює з розрахованим вільним тестостероном у крові, як у здорових чоловіків, так і у пацієнтів з андрогенною недостатністю. Пропонуємо наші набори для дослідження відмінностей між здоровими дорослими та особами з ознаками андрогенної дисфункції, зокрема гіпо- або гіпергонадизмом.

Наша процедура оцінки якості (QAS) – додаткова послуга для вас

Процедуру QAS від Tecan було запропоновано у 2005 році для підтримки стандартів якості тестування стероїдів у слині, оскільки раніше такого не було. QAS проводиться двічі на рік, кожного разу відбувається розповсюдження трьох зразків, які ми вибірково надсилаємо клієнтам. Зразки є стандартами за багатьма параметрами і містять наступне у різних концентраціях:

• Кортизол
• Тестостерон
• Естрадіол
• Прогестерон
• DHEA

Кожен учасник дослідження може надіслати свої результати до Tecan безпосередньо електронною поштою або за допомогою форми, доступної на нашій домашній сторінці. Tecan аналізує отримані результати тестів та надає кожному учаснику лист з даними QAS, який надсилається електронною поштою. Конфіденційність забезпечена протягом усього терміну використанням ідентифікаційного номера, відомого лише Tecan та окремому учаснику.

Щоб дізнатися більше або взяти участь, натисніть тут (click here ).